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摘要】 目的 研究热休克蛋白60基因单核苷酸多态性rs788016和rs2340690基因型在病例组和对照组中的分布及其与冠心病风险的关系。方法 应用Taqman基因分型方法分别检测674例冠心病病人和774名对照的rs788016和rs2340690基因型分布。结果 rs788016和rs2340690各基因型在病例组和对照组的分布差异无统计学意义。按性别、年龄、吸烟状况进行分层后，在年龄<60岁的男性现在吸烟层中，病例组中Hsp 60基因rs788016 GG基因型和rs2340690 CC+CT基因型的频率低于对照组;rs788016 AA+AG[相当于GG，OR(95%CI)=1.78(1.04～3.03)]为该人群中冠心病发病的危险因素;rs2340690 CC+CT[相对于TT，OR(95%CI)=0.58(0.62～5.20)]。分层分析表明，该基因型和冠心病发病无关。采用Logistic回归模型分析男性吸烟组中rs788016基因型与冠心病的关系，调整其他因素后OR(95%CI)=1.74(1.08～2.82)。结论 在年龄<60岁男性现在吸烟人群中，rs788016 AA+AG基因型可以是冠心病发病的危险因素。
【关键词】 冠状动脉疾病;基因;多态性;连锁不平衡;单倍型Association of hsp60 gene polymorphisms with coronary heart disease risk WANG Jing,HE Meian,ZENG Jing,et al.Department of Preventive Medicine,Yunyang Medical College(Shiyan 442000,China)
Abstract： Objective To investigate the relationship between hsp60 polymorphisms and coronary heart disease(CHD).Methods With TaqMan allelic discrimination method and casecontrol study,the frequencies of rs788016 and rs2340690 in 674 patients with CHD and 744 controls were determined.Results The frequencies of rs788016 and rs2340690 genotypes were not different between cases and controls.After adjusting for sex,age and smoking status,the frequencies of rs788016 AA+AG genotype and re2340690 TT genotype in controls were sigificantly higher than that of in patients of male smoker and younger than 60 years.Compared with rs788016 GG genotype,subjects with AA+AG genotype had higher risk of CHD(OR=1.78,95%CI=1.04-3.03).The subjects with rs2340690 CC+CT genotype had similar risk compared with TT genotype(OR=0.58,95%CI=0.62-5.20).The male smoking subjects with rs788016 AA and AG genotype had almost twice of the risk of CHD(OR=1.74,95%CI=1.08-2.82)。Conclusion The genotype of rs788016 may serve as a novel genetic marker for the risk of CHD.Key words： coronary disesae;gene;polymorphism;linkage disequilibrium;haplotype
热休克蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp 60)在冠心病发病中起非常重要的作用，进化上的保守使人和微生物的Hsp 60基因在序列上有很高的同源性，应激状态下的血管内皮细胞、平滑肌细胞会表达Hsp 60，微生物Hsp 60的免疫反应可能和自身的Hsp 60抗原发生交叉反应，导致血管损伤〔1〕。Hsp 60基因改变可能引起Hsp 60质和量的变化，从而参与冠心病的发生发展。本研究旨在探讨Hsp 60基因多态性与冠心病危险度的关系。
1 对象与方法
www.yixueda.com 医学论文网 1.1 对象 病例来源于2002年7月～2006年3月在湖北省武汉市城区各大医院心
内科住院确诊或经冠状动脉造影检查确诊，并符合WHO冠心病诊断标准〔2〕的冠心病患者。对照组来源于武汉城区体检的非冠心病人群，经病史询问、体检及心电图等检查排除有冠心病、严重的肝、肾疾病者。有周围血管疾病或周围血管栓塞疾病者均未入选病例组和对照组。共收集病例674例，其中男性449例，女性225例，平均年龄(63.79±10.38)岁;收集对照744人，其中男性438人，女性306人，平均年龄(59.51±7.77)岁。
1.2 问卷调查和样本收集 采用Inter-heart调查表〔3〕收集研究对象的一般情况。家庭史、职业史、既往史、生活环境、营养情况、生活史等并取得研究对象的知情同意。由调查员进行问卷调查。冠心病病人的调查及样本收集工作在确诊后的3 d内进行。
1.3 Hsp 60基因多态性分析 采用DNA抽提试剂盒(美国Gentra公司)提取外周血DNA。采用Taqman基因分型试剂盒(美国ABI公司)分析rs788016和rs2340690位点的多态性。应用SDS 2.2.1软件分析Taqman基因分型结果。
1.4 统计分析 应用SPSS 12.0软件进行统计分析。计量资料2组间比较经正态性检验为正态性分布采用t检验，分类资料分析和Hardy-Weinberg平衡检验采用χ2检验。分类资料的2组间比较采用χ2检验，显著性水准以双侧α=0.05判断。对阳性结果，计算OR显示各基因型或等位基因与疾病的关联强度。采用Woolf法检验各层间OR的同质性，以P=0.05判断交互作用是否存在。采用多元Logistic回归模型判断冠心病危险因素作用大小,分析混杂因素的控制及交互作用，计算主要危险因素的调整OR及其95%CI。
2 结 果
2.1 一般情况 性别、年龄在病例组和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05)，其中病例组入选的男性较多，对照组女性较多;除总胆固醇外、病例组血糖、吸烟史、高血压史、糖尿病史、心血管疾病家族史均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);体质指数、甘油三酯、饮酒在2组间无明显差异。
2.2 Hardy-Weinberg平衡检验结果 rs788016和rs2340690在对照人群的基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡规律(χ2=2.40，0.65,P=0.12，0.42)说明本实验对照人群具有群体代表性，该人群的rs788016，rs2340690基因型分布可反映整体人群基因的分布情况。在病例组中rs788016基因未达到Hardy-Weinberg平衡(χ2=7.08,P=0.0078)，rs2340690基因符合Hardy-Weinberg平衡规律(χ2=1.29,P=0.255 7)。
2.3 病例组和对照组基因型的比较(表1，2) rs788016基因AA、AG、GG和基因型频率在对照组和病例组分别为7.9%，36.4%，55.6%和8.8%，34.6%，56.7%。A、G等位基因频率在对照组和病例组分别为73.9%，26.1%和74.0%，26.0%。经χ2检验，rs788016和基因型和等位基因在对照组和病例组中分布差异无统计学意义。rs2340690基因CC，TC和TT基因型频率在对照组和病例组分别为7.7%，37.9%，54.4%和9.0%，39.0%，51.9%。C、T等位基因频率在对照组和病例组分别为26.6%，73.4%和28.6%，71.4%。经χ2检验，rs2340690各基因型和等位基因在对照组和病例组中分布差异无统计学意义。按性别、吸烟状态和年龄(以60岁划分)进行分层比较rs788016和rs2340690基因型在病例组和对照组的分布。经Woolf法检验，rs788016基因型的分布在各层间不同质(P=0.04)，在年龄<60岁男性现在吸烟层中，对照组与病例组和rs788016分布差异有统计学意义(P<0.05)。该基因型分布在其他层内未见差异。rs2340690基因型分布在各层间同质，进行分层χ2检验(χ2MH=0.37，P=0.54)，说明混杂效应后rs2340690基因型与冠心病危险度关系差异无统计学意义。表1 不同特征及组别男性rs788016基因分布比较
2.4 其他因素和冠心病的关系 采用多元逐步Logistic回归分析性别、年龄、体质指数、吸烟史、饮酒史、高血压史、糖尿病史、心血管疾病家族史与冠心病的关系。进入回归模型的因素有年龄(β=0.58，OR=1.79，OR95%CI=1.39～3.20)、高血压病史(β=1.01，OR=1.79，OR95%CI=1.39～2.30)、吸烟状态(β=0.82，OR=2.29，OR95%CI=1.60～3.27)、糖尿病病史(β=1.41，OR=4.11，OR95%CI=3.05～5.44)、心血管疾病家族史(β=0.84，OR=2.31，OR95%CI=1.57～3.39)。表2 不同特征及组别男性rs2340690基因分布比较
2.5 男性rs788016基因及其他因素联合作用与冠心病关系(表3) 将人数以性别、吸烟状况进行分组，进行多元逐步Logistic回归分析。在男性吸烟组中调整高血压史、糖尿病史、心血管疾病家族史后，rs788016基因仍和冠心病显著相关。其余分组中，rs788016基因均未进入模
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